Transformatie van E. coli met groen fluorescerend eiwit

In dit experiment verkennen leerlingen het biologische proces van bacteriële transformatie met behulp van E. coli en plasmide DNA. Aan het einde van de activiteit hebben de leerlingen ervaring met het observeren en analyseren van verworven eigenschappen (ampicillineresistentie en fluorescentie) zoals die worden vertoond door getransformeerde bacteriecellen.

- Verken genetische manipulatie en het centrale dogma met dit elegante experiment
- Transformeer E.coli met pFluoroGreen™ - een plasmide dat genen bevat voor ampicillineresistentie en het groene fluorescerende eiwit
- Selecteer getransformeerde cellen met LB-ampicillineplaten en bereken de transformatie-efficiëntie
- Stel getransformeerde cellen bloot aan IPTG om differentiële genexpressie aan te tonen.
- Nieuw transformatieprotocol heeft hoge transformatie-efficiëntie = geweldige resultaten!

Groepsgrootte:
Voor 10 labgroepen

Benodigde tijd:
Opzetten - 50 minuten / Incubatie - een nacht / Transformatie - 15 minuten

Kit bevat:
Instructies, BactoBeads™ E. coli GFP Host, supergewikkeld pFluoroGreen™ plasmide DNA, ampicilline, IPTG, CaCl2, groeimedium, ReadyPour™ Luria Broth Agar (steriel), Luria Broth Medium for Recovery (steriel), petrischalen (klein), petrischalen (groot), plastic transferpipetten met microtip, omhulde 10 ml pipet (steriel), tandenstokers (steriel), inoculatielussen (steriel), microcentrifugebuizen.

Alles wat je nodig hebt:
Automatische micropipet (5-50 µl) en tips, twee waterbaden (37ºC en 42ºC), thermometer, broedstoof (37ºC), pipetpompen of -bollen, ijs, markeerstiften, bunsenbrander, hete plaat of magnetron, hete handschoenen, UV-licht met lange golflengte

Opslag:
Sommige componenten moeten in de koelkast of vriezer worden bewaard.

Voor dit experiment is een vergunning van het RIVM nodig